豬藍耳經(jīng)典致病PRRSV-C/PRRSV-M雙重熒光PCR說明書

【產(chǎn)品名稱】

商品名稱：豬藍耳病毒經(jīng)典型/高致病性（PRRSV-C/PRRSV-M）?核酸檢測試劑盒（實時熒光-PCR 法）

英 文 名 ：Classical/high pathogenicity (PRRSV-C/PRRSV-M) nucleic acid detection kit for porcine blue ear virus (real-time fluorescent -PCR)

【包裝規(guī)格】48T/盒

【預(yù)期用途】

豬藍耳病毒經(jīng)典型/高致病性（PRRSV-C/PRRSV-M），是由A型流感病毒引起禽類的一種從呼吸系統(tǒng)到嚴重全身敗血癥等多種癥狀的傳染病[1]。其中PRRSV-C/PRRSV-M，不僅可以感染禽類，也可以感染人類，特別是1999年以來，嚴重威脅了人類健康、畜牧業(yè)生產(chǎn)和畜產(chǎn)品的貿(mào)易，其公共衛(wèi)生意義已引起*的廣泛關(guān)注[4]。本試劑盒利用實時熒光PCR原理，定性、定量檢測PRRSV-C/PRRSV-M，對PRRSV-C/PRRSV-M引起的流感診斷有重要指導意義。

【檢驗原理】

本試劑盒針對PRRSV-C/PRRSV-M? 基因高度保守區(qū)域設(shè)計特異性引物和探針， 在反應(yīng)體系中含基因組模板的情況下，PCR反應(yīng)得以進行并釋放熒光信號。利用儀器對PCR過程中相應(yīng)通道的信號強度進行實時監(jiān)測和輸出，實現(xiàn)檢測    結(jié)果的定性、定量分析。

【試劑組成】

名 稱 規(guī) 格

酶液 50μL×1 管

AIV-H9 反應(yīng)液 1.0mL×1 管

AIV-H9 陽性質(zhì)控品 50μL ×1 管

陰性質(zhì)控品 250μL ×1 管

注：

1）不同批號試劑不能混用。

2）試劑盒內(nèi)各試劑組份足夠包裝規(guī)格所標示的檢測次數(shù)。

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復凍融次數(shù)不超過 5 次，有效期 12 個月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

【標本采集】

病死或撲殺禽，取喉氣管、腦、胸肌、心肌和肺等組織；待檢活禽，用棉拭子取呼吸道分泌物或排泄物，置于 1mL 50%甘油生理鹽水中。

【保存和運輸】

上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月，標本運送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運輸，嚴禁反復凍融。

【使用方法】

1.樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

每份組織分別從 3 個不同的位置稱取樣品約 1g，手術(shù)剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中，

8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中；棉拭子直接取 100

μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。

1.2RNA 提取

推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的RNA 提取試劑盒（離心柱提取法），請按照試劑盒說明書進行操作。

2.試劑配制（試劑準備區(qū)）

根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測試反應(yīng)體系配制如下表：

6.質(zhì)控標準

陰性質(zhì)控品：無明顯擴增曲線丏無 Ct 值顯示；

陽性質(zhì)控品：擴增曲線有明顯指數(shù)生長期，丏 Ct 值≤32； 以上條件應(yīng)同時滿足，否則實驗視為無效。

【參考文獻】

[1]WEBSTER R G, BEAN W J, GORMA N O T, et al. Evolution and ecology of influenza A viruses [J] . Microbiol Rev, 1992, 56(1): 152 -179.

[2]GUO Y J, KRAUSS S, SENNE D A, et al. Characterization of the pathogenicity of members of the newly established H9N2 influenza virus lineages in Asia

[J] .Virology, 2000, 267( 2):279 -288.

[3]唐秀英, 付朝陽, 馮菊艷. H9 亞型禽流感的流行不防制[J] . 預(yù)防獸醫(yī)學進展, 2000, 2( 4): 1-3.

[4]郭元吉, 李建國, 程小雯, 等. 禽 H9N2 亞型流感病毒能感染人的發(fā)現(xiàn)[J] . 中華實驗和臨床病毒學雜志, 1999, 13( 2): 105-108.

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